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生活飲用水中菌落總數/總大腸菌群質控樣品平板計數法CFU解析
點擊次數:48 更新時間:2026-02-06


生活飲用水中菌落總數/總大腸菌群等使用的平板計數法CFU解析


      平板計數法是活菌計數的方法,平板計數法/稀釋平板法,該方法通過梯度稀釋樣品使微生物分散為單細胞,將稀釋液與培養基混合或涂布于平板,待單個細胞形成菌落后,根據菌落數、稀釋倍數及取樣量計算微生物數量。


適用范圍:細菌、酵母菌等可培養微生物的計數,測定結果以菌落形成單位(CFU)表示。


操作流程分為:樣品稀釋、傾注培養、菌落計數三個階段。


      常用稀釋液為滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液,培養基需保持46℃以防止瓊脂凝固。固體樣品需均質處理確保稀釋均勻。由于僅能檢測可培養微生物且培養基存在選擇性,平板計數法可能低估實際微生物數量。該方法在土壤微生物分析、食品衛生檢測及芽胞桿菌研究中均有應用,菌落總數測定可反映食品受細菌污染程度。

      平板計數法是一種廣泛應用于微生物學領域的活菌計數技術,其核心原理是:通過將樣品進行梯度稀釋,使微生物分散為單個細胞,接種到固體培養基上后,每個活細胞在適宜條件下生長繁殖形成肉眼可見的菌落,通過統計菌落數量,并結合稀釋倍數和接種量,即可推算出原始樣品中的活菌濃度,結果通常以“菌落形成單位"(CFU, Colony-Forming Units)表示。

該方法主要適用于能在固體培養基上形成獨立菌落的單細胞微生物,如細菌、酵母菌以及可產生孢子的真菌等。由于其僅能計數可培養的活菌,因此在食品衛生檢測、水質評估、生物制品質量控制等領域具有重要應用價值。


平板計數法操作類型涵蓋:


1.傾注平板法(混合平板法)?

將一定量的稀釋菌液加入無菌培養皿中,隨后倒入已融化并冷卻至45–50℃的瓊脂培養基,輕輕旋轉混勻,待凝固后倒置培養。此法有利于兼性厭氧菌的生長,但高溫可能對熱敏感菌造成損傷。


2.涂布平板法?

先將瓊脂培養基倒入培養皿中凝固,再取0.1–0.2 mL稀釋菌液滴加于表面,用無菌涂布器均勻涂抹。該方法避免了高溫影響,適合對熱敏感微生物的計數,但取樣量較小,代表性可能受限。

表面接種法(如螺旋接種)?

利用自動化設備將菌液以螺旋軌跡接種于瓊脂表面,結合圖像分析系統進行快速計數,適用于大批量樣品的高效檢測。


優點:?

僅計數具有活性、能繁殖的微生物,反映真實活菌水平。

可獲得單菌落,便于后續分離純化與鑒定。

操作原理清晰,結果可重復性較高,是食品、水樣等衛生檢測的標準方法之一。

缺點:?

耗時較長,需24–48小時培養才能獲得結果。

微生物可能未分散成單細胞,導致一個菌落由多個細胞形成,結果偏低。

培養基和培養條件具有選擇性,無法檢測所有微生物,尤其對難培養或處于VBNC(活的非可培養)狀態的微生物無效。

食品顆?;螂s質可能干擾菌落識別,影響計數準確性。

 

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